(一)本發(fā)明涉及一種紫芝可溶性膳食纖維及其制備方法和在制備改善非酒精性脂肪肝的功能食品或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
0、(二)背景技術(shù)
1、非酒精性脂肪性肝病(nafld)是全球最常見(jiàn)的慢性肝病之一，影響全球約25％-30％的人口。不同地區(qū)的患病率存在顯著差異，但總體上呈現(xiàn)出隨肥胖率和代謝綜合征患病率上升的趨勢(shì)。隨著全球生活方式的西化和肥胖率的增加，nafld的患病率可能會(huì)進(jìn)一步上升，這需要引起公共衛(wèi)生領(lǐng)域的高度重視。此外，nafld不僅影響肝臟健康，還可能導(dǎo)致多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，涉及多個(gè)系統(tǒng)。這些并發(fā)癥包括肝纖維化、肝硬化、肝癌、心血管疾病、2型糖尿病、慢性腎病和代謝綜合征等。這些并發(fā)癥相互作用，形成惡性循環(huán)，進(jìn)一步加重nafld的進(jìn)展。因此，早期診斷和綜合治療對(duì)于改善nafld患者至關(guān)重要。但目前主要應(yīng)用的藥物治療和手術(shù)治療只單一作用于某個(gè)靶點(diǎn)，副作用明顯，效果并不理想。
2、靈芝作為食藥同源珍貴真菌在我國(guó)自古以來(lái)就有食用或藥用的習(xí)慣，靈芝增強(qiáng)免疫力、延年益壽的功能被人們所熟知，通過(guò)食補(bǔ)的方式干預(yù)生活習(xí)慣，預(yù)防和輔助治療nafld有潛在的應(yīng)用前景。大量研究證明赤芝中的三萜類和多糖類能夠顯著減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)、減少肝臟脂肪積累、調(diào)節(jié)腸道菌群和抑制肝損傷。但是赤芝三萜有非常明顯的苦味且分離技術(shù)復(fù)雜效果不明顯，會(huì)影響其在食品和保健品中的應(yīng)用。紫芝味道平淡更適合食用，近年來(lái)，中國(guó)紫芝的產(chǎn)量逐年增加。根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2023年中國(guó)紫芝的年產(chǎn)量約為10，000噸，隨著市場(chǎng)需求的增加，紫芝的種植面積不斷擴(kuò)大。2023年，全國(guó)紫芝種植面積約為50，000畝，較2020年增長(zhǎng)了約30％。有研究證明紫芝具有護(hù)肝作用，然而，紫芝對(duì)nafld和脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病的預(yù)防和治療作用尚未得到系統(tǒng)分析。若能清晰闡明紫芝活性成分對(duì)nafld具有顯著的改善作用，并深入揭示其作用機(jī)制，進(jìn)而將其應(yīng)用于食品與藥品領(lǐng)域，不僅可充分挖掘與利用這一珍貴藥用資源，更為nafld的臨床治療提供了一種創(chuàng)新且有效的策略，具有重要的科學(xué)價(jià)值與廣闊的應(yīng)用前景。
3、本發(fā)明采用紫芝子實(shí)體作為原材料制備可溶性膳食纖維，并建立nafld細(xì)胞和動(dòng)物模型探究紫芝可溶性膳食纖維對(duì)nafld的作用效果。為飲食干預(yù)緩解nafld和開(kāi)發(fā)紫芝護(hù)肝膳食補(bǔ)充劑的后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
0、(三)
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
1、針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種紫芝可溶性膳食纖維的制備方法和制得的紫芝可溶性膳食纖維在制備改善非酒精性脂肪肝的功能食品或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
2、為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
3、第一方面，本發(fā)明提供了一種紫芝可溶性膳食纖維的制備方法，包括如下步驟：
4、步驟1：將紫芝子實(shí)體干燥、切片、粉碎得到紫芝粉末；
5、步驟2：將紫芝粉末加入ph在7.9-8.1之間的mes-tris緩沖液中攪拌均勻，然后加入高溫α-淀粉酶充分酶解，酶解完畢后再加入中性蛋白酶進(jìn)行充分酶解，所得酶解混合物經(jīng)過(guò)濾、離心收集上清液、上清液濃縮后進(jìn)行醇沉，再收集沉淀，除醇后再經(jīng)冷凍干燥得到紫芝可溶性膳食纖維。
6、本發(fā)明步驟(2)中，所述紫芝粉末與mes-tris緩沖液的料液比為1g：(10-50)ml，優(yōu)選1g：(30-35)ml，更優(yōu)選為1g:32ml。
7、本發(fā)明對(duì)于高溫α-淀粉酶和中性蛋白酶的選擇沒(méi)有特別要求，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)使用的兩種酶的性質(zhì)確定合適的酶解條件，比如酶的加入量、酶解溫度和酶解時(shí)間等。作為一種實(shí)施方式，加入高溫α-淀粉酶(如加入2-3wt％高溫α-淀粉酶)后可以在80-100℃中恒溫反應(yīng)40-120min，進(jìn)一步，酶解溫度為95-100℃，酶解時(shí)間為100-110min。作為一種實(shí)施方式，加入中性蛋白酶(如加入2.5-3.5％中性蛋白酶)后，中性蛋白酶的酶解可以在30-60℃下進(jìn)行，酶解時(shí)間可以是30-40min。
8、本發(fā)明步驟(2)中，優(yōu)選使上清液旋蒸濃縮至原體積的1/4到1/5，然后加入4倍體積的95％乙醇攪拌均勻在0-10℃下醇沉12-24h(更優(yōu)選在4℃醇沉12h)，收集沉淀，加水旋蒸去除乙醇，再經(jīng)過(guò)冷凍干燥后得到紫芝可溶性膳食纖維。
9、第二方面，本發(fā)明提供了一種根據(jù)第一方面所述制備方法制得的紫芝可溶性膳食纖維。
10、第三方面，本發(fā)明提供了第二方面所述的紫芝可溶性膳食纖維在制備改善非酒精性脂肪肝的功能食品或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
11、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：
12、1.本發(fā)明制備的紫芝可溶性膳食纖維是一種表面凹凸不平，具有多孔結(jié)構(gòu)的由單糖聚合形成的大分子糖鏈。主要由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、巖藻糖和木糖組成。此外，具有良好的吸附能力：持水率5.63％、持油率4.87％、膨脹率2.32％、葡萄糖吸附率27.75mmol/g、膽固醇吸附率在ph?2.0和7.0時(shí)分別為2.07mg/g和3.47mg/g。
13、2.紫芝可溶性膳食纖維在一定濃度內(nèi)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，能顯著減少細(xì)胞內(nèi)脂滴含量，增強(qiáng)抗氧化酶活性，清除自由基緩解氧化應(yīng)激。能顯著降低小鼠的體重、肝臟和內(nèi)臟脂肪的重量，改善了血脂水平和肝損傷標(biāo)志物(alt、ast)的水平。此外，紫芝可溶性膳食纖維顯著減少了肝臟內(nèi)的脂質(zhì)積累和氧化應(yīng)激。
14、3.紫芝可溶性膳食纖維可以調(diào)節(jié)甘油磷脂代謝途徑，通過(guò)激活ampk和ppar信號(hào)通路增加脂肪酸氧化p-acc和pparα蛋白表達(dá)和抑制脂肪酸合成酶fasn蛋白表達(dá)，改善了小鼠肝組織中dg、tg、pc、pe、pa等關(guān)鍵代謝物的代謝異常，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝減少肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積，起到改善nafld的作用。
1.一種紫芝可溶性膳食纖維的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括如下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述紫芝粉末與mes-tris緩沖液的料液比為1g：(10-50)ml。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述紫芝粉末與mes-tris緩沖液的料液比為1g：(30-35)ml。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述紫芝粉末與mes-tris緩沖液的料液比為1g：32ml。
5.如權(quán)利要求1-4之一所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，使上清液旋蒸濃縮至原體積的1/4到1/5，然后加入4倍體積的95％乙醇攪拌均勻，在0-10℃下醇沉12-24h，收集沉淀，加水旋蒸去除乙醇，再經(jīng)過(guò)冷凍干燥后得到紫芝可溶性膳食纖維。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，使上清液旋蒸濃縮至原體積的1/4到1/5，然后加入4倍體積的95％乙醇攪拌均勻，在4℃醇沉12h，收集沉淀，加水旋蒸去除乙醇，再經(jīng)過(guò)冷凍干燥后得到紫芝可溶性膳食纖維。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，加入高溫α-淀粉酶后在80-100℃中恒溫反應(yīng)40-120min，進(jìn)一步，酶解溫度為95-100℃，酶解時(shí)間為100-110min。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，加入中性蛋白酶后，中性蛋白酶的酶解在30-60℃下進(jìn)行，酶解時(shí)間是30-40min。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述制備方法制得的紫芝可溶性膳食纖維。
10.如權(quán)利要求9所述的紫芝可溶性膳食纖維在制備改善非酒精性脂肪肝的功能食品或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。