本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物，尤其涉及重樓皂苷h在制備抗核盤菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、重樓屬(paris)植物是傳統(tǒng)中藥“重樓”的來源，其甾體皂苷類成分具有抗菌、抗炎等多種生物活性?，F(xiàn)代藥理研究表明，重樓屬植物可用于鼻咽癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、子宮肌瘤、白血病等疾病的治療，其抑制腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)、改變與腫瘤細(xì)胞生長的相關(guān)蛋白活性、抑制腫瘤細(xì)胞生長周期及其內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和毛細(xì)血管形成等有關(guān)。

2、核盤菌(sclerotinia?sclerotiorum)是一種嚴(yán)重危害農(nóng)作物的病原真菌，可侵染油菜、大豆等400余種植物，導(dǎo)致苗期猝倒、莖腐和貯藏期腐爛，造成顯著經(jīng)濟(jì)損失。目前，化學(xué)殺菌劑是防治核盤菌的主要手段，但長期使用易導(dǎo)致抗藥性、環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留等問題。因此，開發(fā)環(huán)境友好的新型抗真菌藥劑具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是開發(fā)一種來源于重樓植物的抗真菌藥劑，尤其是抗核盤菌。

2、為了解決上述問題，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供重樓皂苷h在制備抗核盤菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用，所述重樓皂苷h的分子式為c44h70o17，化學(xué)結(jié)構(gòu)如式1所示：

4、

5、第二方面，本發(fā)明提供一種抗核盤菌藥劑，包括重樓皂苷h且以重樓皂苷h為活性成份。

6、進(jìn)一步地，所述抗核盤菌藥劑中，重樓皂苷h的濃度為4-200mg/l。

7、進(jìn)一步地，所述抗核盤菌藥劑還包括農(nóng)業(yè)上可接受的賦形劑或載體。

8、第三方面，本發(fā)明提供一種殺菌組合物，所述殺菌組合物含有活性成份重樓皂苷h，所述殺菌組合物用于防治由核盤菌屬引起的病害。

9、進(jìn)一步地，所述殺菌組合物中，重樓皂苷h的濃度為4-200mg/l。

10、按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤菌藥劑在實際應(yīng)用時可配制成農(nóng)業(yè)上允許的任意劑型，例如水分散粒劑、懸浮劑、可濕性粉劑、微乳劑、水乳劑。

11、對水分散粒劑，可選的助劑包括：分散劑選用自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽；潤濕劑選自聚氧乙烯醇、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽；崩解劑選自硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、氯化鋁、檸檬酸、丁二酸、碳酸氫鈉；粘結(jié)劑選自硅藻土、玉米淀粉、pva、羧甲基(乙基)纖維素類；填料選自硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、海泡石、滑石粉、凹凸棒土、陶土。

12、對可濕性粉劑，可選的助劑包括：分散劑選自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽；潤濕劑選自烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽；填料選自硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、滑石粉、凹凸棒土、陶土。

13、對懸浮劑，可選的助劑包括：分散劑選自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽、tersperse?2425(美國亨斯邁公司出品，烷基萘磺酸鹽類)；乳化劑選自農(nóng)乳700#(通用名：烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚)、農(nóng)乳2201、斯盤-60#(通用名：山梨醇酐單硬脂酸酯)、乳化劑t-60(通用名：失水山梨醇單硬脂酸酯聚氧乙烯醚)、農(nóng)乳1601#(通用名：苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚)、tersperse4894(美國亨斯邁公司出品)；潤濕劑選自烷基酚聚氧乙烯聚基醚甲醛縮合物硫酸鹽、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽、tersperse?2500(美國亨斯邁公司出品)；增稠劑選自黃原膠、聚乙烯醇、膨潤土；防腐劑選自甲醛、苯甲酸、苯甲酸鈉；消泡劑為有機(jī)硅類消泡劑；防凍劑選自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無機(jī)鹽類如氯化鈉。

14、對水乳劑，可選的助劑包括：乳化劑選自壬基酚聚氧乙烯(eo＝10)醚磷酸酯、三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯(農(nóng)乳600#磷酸酯)、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201#、span-60#、乳化劑t-60、tx-10、農(nóng)乳1601#、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#；溶劑選自二甲苯、甲苯、環(huán)己酮、溶劑油(牌號：s-150、s-180、s-200)；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷、醋酐；防凍劑選自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無機(jī)鹽類如氯化鈉；增稠劑選自黃原膠、聚乙烯醇、膨潤土、硅酸鎂鋁；防腐劑選自甲醇、苯甲酸、苯甲酸鈉。

15、對微乳劑，可選的助劑包括：乳化劑選自十二烷基苯磺酸鈣(農(nóng)乳500#)、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201#、斯盤-60#、吐溫-80-60#、tx-10、農(nóng)乳1601、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#；助乳化劑選自甲醇、異丙醇、正丁醇、乙醇；溶劑選自環(huán)己酮、n-甲基吡咯烷酮、二甲苯、甲苯、溶劑油(牌號：s-150、s-180、s-200)；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷。

16、本發(fā)明所述的殺菌組合物或所述的抗核盤菌藥劑可以以成品制劑形式提供，即組合物中各物質(zhì)已經(jīng)混合；也可以以單劑制劑提供，使用前在桶(罐)中直接混合。本發(fā)明的濃縮物通常與水混合得到所需要活性物質(zhì)的濃度。

17、本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤菌藥劑可用于防治包括核盤菌屬等引起的重要病害。本發(fā)明所述的殺菌組合物的施用場所為農(nóng)田、果園等。

18、本發(fā)明還提供了一種殺菌的方法，在作物和/或果實感病之前或之后，向作物和/或果實及其生長或儲存的場所施用本發(fā)明的組合物或抗核盤菌藥劑?？梢园雌胀ǖ姆椒ㄊ┯?，如澆注、噴射、噴霧、撒粉、散布。本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤菌藥劑的施用量隨天氣條件或作物狀態(tài)變化。保護(hù)作用的持續(xù)時間通常與組合物中單個化合物的含量有關(guān)，與外界因素相關(guān)，例如氣候，但通過使用適當(dāng)?shù)膭┬涂梢詼p緩氣候的影響。

19、本發(fā)明還提供一種重樓皂苷h的制備方法，以啟良重樓為原料進(jìn)行制備。

20、該制備方法包括以下步驟:

21、啟良重樓干燥根莖粉碎后，用65-80％乙醇冷浸提取2-4次，每次20-30小時，過濾后，減壓回收乙醇，得浸膏；

22、將所述浸膏加入水后混勻，依次用等體積的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行分配萃??；減壓除去溶劑得到五個主要部分：pe部分、dcm部分、ea部分、n-buoh部分和水相殘留物；

23、將ea部分經(jīng)ods-a-hg柱層析，按甲醇/水體積比為45：55，50：50，55：45，60：40，65：35，70：30，75：25，80：20，85：15，90：10，95：5，100：0進(jìn)行梯度洗脫，tlc檢測合并相同餾分，得到fr.c1--c11共11個餾分段；

24、將fr.c8餾分再經(jīng)硅膠柱層析化段，二氯甲烷/甲醇體積比20：1，15：1，12：1，10：1，8：1，6：1，3：1進(jìn)行梯度洗脫，合并得到6個餾分段，fr.c8.1-c8.6；

25、將fr.c8.5再經(jīng)硅膠柱層析化段，二氯甲烷/甲醇體積比15：1，12：1，10：1，8：1，6：1，4：1，3：1進(jìn)行梯度洗脫，合并得到7個餾分段，fr.c8.5.1-c8.5.7；

26、將fr.c8.5.4經(jīng)sephadex?lh-20柱層析分離，甲醇洗脫，合并得到高純度重樓皂苷h。

27、啟良重樓(paris?qiliangiana)是2017年發(fā)現(xiàn)的重樓屬新物種[yang,j.,wang,y.h.,li,h.paris?qiliangiana(melanthiaceae),a?new?species?from?hubei,china[j].phytotaxa,2017,329,193–196.]，但其化學(xué)成分和生物活性尚未被系統(tǒng)研究。相同的提取工藝下，相比于其他重樓屬植物，本發(fā)明首次從啟良重樓中分離得到高純度、高含量的重樓皂苷h。

28、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所能達(dá)到的技術(shù)效果包括：

29、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了重樓皂苷h具有強(qiáng)效抗核盤菌活性的作用，并提供重樓皂苷h在制備抗核盤菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用，為開發(fā)天然來源的抗真菌藥劑提供了新的技術(shù)方案。

30、本發(fā)明首次公開了從啟良重樓中快速大量提取分離化合物重樓皂苷h的制備方法，啟良重樓作為重樓屬新資源，其皂苷類成分的開發(fā)有望推動農(nóng)業(yè)綠色防控技術(shù)的發(fā)展。